基于均匀设计法评价制川乌与川贝、浙贝反药配伍组合的镇痛和祛痰镇咳作用

计划（973）项目（2011CB505300， 2011CB505305）；国家自然科学基金面上项目（81173628）

[通信作者] *林娜，研究员，博士生导师，研究方向为中药药性理论和中药药理，Tel：（010）64014411-2869，E-mail：linna888@163.com

[作者简介] 谭淑芳，硕士研究生，Tel：（010）64014411-2869，E-mail：tsfgoodluck@126.com 乌头和贝母都为临床常用中药，因传统中医理论中的中药配伍禁忌“十八反”有“半蒌贝蔹芨攻乌”之说，乌头反贝母仍被中医理论普遍认同。近代的临床案例、实验研究中有不少证明乌头贝母同用具相反作用及支持二者配伍能增强毒性的观点，但与此同时，将二者配伍使用治疗顽疾取得良好疗效的临床案例也常见报道^[1-2]。有学者认为十八反组对能否同用与配伍比例及剂量等密切相关^[3]。故此，本研究采用均匀设计的方法，以乌头与贝母的主要药理作用为观察指标，评价制川乌分别与川贝、浙贝不同剂量配比的合煎液口服后对小鼠镇痛、祛痰、镇咳作用的影响，以便为十八反反药组合作用的深入研究提供实验依据。

1 材料

1.1 动物 ICR小鼠，雄性，体重18～22 g，来源于中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，动物许可证号SCXK（军）2007-004。

1.2 药材 制川乌产自四川江油，川贝产自四川，浙贝产自浙江，均购自北京华邈中药工程技术开发中心；经中国中医科学院中药研究所王孝涛研究员鉴定，分别为毛茛科植物乌头 Aconitum carmichaelii Debx.的干燥母根的加工炮制品、百合科植物川贝 Fritillaria cirrhosa D. Don和浙贝母 F.thunbergii Miq.的干燥鳞茎。

1.3 试剂 乙酸（冰醋酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号10000292）；二甲苯（分析纯，北京化工厂，批号20091124）；氨水（分析纯，北京化工厂，批号20100502）；苯酚红（国药集团化学试剂有限公司，批号F20070402）；碳酸氢钠（分析纯，北京化工厂，批号20100716）。

1.4 仪器 HF-200电子天平（赛多利斯公司）；SHZ（Ⅲ）循环水式真空泵（河南省予华仪器有限公司）；YLS-Q4耳肿打孔器（济南盖延科技发展有限公司）；402A1型鱼跃牌超声雾化器（江苏鱼跃医疗设备股份有限公司）；MK3型全自动酶标仪（德国Thermo公司）。

2 方法

2.1 药品制备 制川乌与川贝或浙贝分别按均匀设计的不同剂量配比混合后加入圆底烧瓶中，加10倍量蒸馏水，浸泡1 h；电热套加热，第1煎1.5 h，过滤；第2煎加8倍量的蒸馏水，煎煮1.5 h，过滤；合并2次滤液。60 ℃旋蒸浓缩，浓缩到实验所需要体积，4 ℃备用。

2.2 分组与给药 将制川乌、川贝或浙贝分别作为考察因素，每个因素各设7个水平，按均匀设计U7（72）及其使用表进行安排，共得7种配比，具体见表1。以前期探索的制川乌镇痛抗炎作用的有效剂量、川贝或浙贝镇咳祛痰作用的有效剂量为依据，确定制川乌剂量范围为0.16～21.6 g·kg^-1、川贝为0.03～15 g·kg^-1、浙贝为0.2～15 g·kg^-1。

表1 2因素7水平均匀设计表U7（72）

Table 1 2 factors and 7 levels of uniform design table U7（72）

雄性ICR小鼠150只，体重（20±2） g，随机分为15组，每组10只，即模型组，配伍A，B，C，D，E，F，G，H，A′，B′，C′，D′，E′，F′，G′，H′组，各配伍组按表2或3设计的剂量灌胃给药，按10 g体重0.2 mL给药，同时模型给予生理盐水对照。

表2 制川乌与川贝配伍均匀设计剂量表

Table 2 The dose proportion of Aconiti Radix Cocta and Fritillaria cirrhosa based on uniform design